目的和原理 水中細菌總數往往同水體受有機物污染的程度呈正相關，它是評價水質污染程度的一個重要指標之一。由于重金屬及某些其它有毒物質對細菌有殺滅或抑制作用，因此總細菌數少的水樣，并不能排除已被這些物質所污染。

　　本試驗采用標準平皿法對水樣中細菌作計數，這是一種測定水中好氧的和兼性厭氧的異養細菌密度的方法，由于細菌在水體中能以單獨個體、成對、鏈狀，成簇或成團的形式存在，此外沒有單獨的一種培養基或某一環境條件能滿足一個水樣中所有細菌的生理要求，所以由此法所得的菌落數實際上要低于被測水樣中真正存在的活細菌的數目。細期總數是指1毫升水樣在營養瓊脂培養基中，37℃、24小時培養后所生長的菌落數。一般規定，1毫升自來水中總菌數不得超過 100個。 9.4.1.2 材料和器皿 (1)培養基

　　①營養瓊脂培養基

　　②2216E培養基：蛋白胨 5.0克; 酵母膏 1.0克; FePO4 0.01克; 瓊脂 18.0克; 陳海水 1000毫升; pH 7.6～7.8

　　(2)無菌采樣瓶、滅菌移液管、滅菌培養皿，盛有90ml及 9mL滅菌蒸餾水的錐形瓶和試管。 方法和步驟 (1)采集水樣。

　　(2)吸取10 ml水樣(河水、污水、游泳池水或港灣水等)，注進盛有90ml無菌水或無菌海水的三角瓶中，混勻成10-1稀釋液，在吸水樣前，水樣應徹底攪動均勻。

　　(3)按10倍稀釋法將水樣稀釋成10-2、10-3、10-4。

　　(4)根據水樣的潔凈程度，污染嚴重者選取10-2、10-3、10-4稀釋度;中等的選取10-1、10-2、10-3稀釋度，每個稀釋液分別注進兩個培養皿，每皿 1ml。稀釋度的選擇是本試驗精確度的關鍵，選擇適宜者，平皿上菌落總數介于30—300個之間。

　　(5)注進徹底融化，然后冷卻到45℃的營養瓊脂培養基(用于河水樣)或2216E培養基(用于海水、港灣水樣)約15ml，立即旋搖培養血，充分混勻，水平放置至固化。

　　(6)接種河水的培養皿，顛倒于37℃培養24小時。接種海水樣，港灣水樣的培養皿，應顛倒后于18—20℃下培養到長出明顯菌落(5天左右)止。 結果與分析 取同一稀釋度的平板培養物，依菌落計算原則進行計算。

　　(1)菌落計算原則

　　平皿菌落的計算，可用肉眼觀察，必要時用放大鏡檢查，防止遺漏，也可借助于菌落計數器計數。對長得相當接近，但不相觸的菌落，應予以—一計數。對鏈狀菌落，應當作為一個菌落來計算。平皿中若有較大片狀菌落時則不宜采用，若片狀菌落少于平皿的一半時，而另一半中菌落分布又均勻，則可將其菌落數的2倍作為全皿的數目。算出同一稀釋度的均勻菌數，供下一步計算時用。

　　(2)計算方法

　　①首先選擇均勻菌落數在30～300者進行計算。當只有一個稀釋度的均勻菌落數符合此范圍時，即可用它作為均勻值乘其稀釋倍數(見表5-9的例1)。

　　②若有兩個稀釋度的均勻菌落數都在30—300之間，則應按兩者的比值來決定。若其比例小于2，應報告兩者的均勻數;若大于2，則報告其中較小的數字(見表7-例2和例3)。

　　③假如所有稀釋度的均勻菌落數均大于300，則應按稀釋度最高的均勻菌落數乘以稀釋倍數報告之(見表5-9例4)

　　④若所有稀釋度的均勻菌落數均小于30，則應按稀釋度最低的均勻菌落數乘以稀釋倍數報告之(見表5-9例5)。

　　⑤假如全部稀釋度的均勻菌落數均不在30—300之間，則以最接近300或30的均勻菌落數乘以稀釋倍數報告之(見表5-9例6)。

　　③菌落計數的報告，菌落在100以內時，按實有數報告;大于100時，采用二位有效數字，在二位有效數字后面的數值，以四舍五進方法計算，為了縮短數字后面的零數也可用10的指數來表示(見表5-9的“報告方式”欄)。

　　表5-9 稀釋度選擇及菌落報告方式

　　例次

　　不同稀釋度的均勻菌落數

　　兩個稀釋度菌落數之比

　　菌落總數(個/ml)

　　報告方式(個/ml)

　　10 -1

　　10 -2

　　10-3

　　1

　　1360

　　164

　　20

　　-

　　16400

　　16000或1.6×104

　　2

　　2760

　　295

　　46

　　1.6

　　37750

　　38000或3.8×104

　　3

　　2890

　　271

　　60

　　2.2

　　27100

　　27000或7×104

　　4

　　無法計數

　　4651

　　513

　　-

　　513000

　　510000或5.1×105

　　5

　　27

　　11

　　5

　　-

　　270

　　270或2.7×102

　　6

　　無法計數

　　305

　　12

　　-

　　30500

　　31000或3.1×104

　　水中大腸菌群(Coliform group)細菌的檢測

　　目的和原理 假如水源被糞便污染，則有可能也被腸道病原菌污染而引起腸道傳染病。由于腸道病原菌在水中數目較少，故從水中特別是自來水中分離病原菌經常非常困難。大腸菌群細菌是腸道好氧菌中最普遍和數目最多的一類細菌，所以經常將其作為糞便污染的指示菌。即根據水中大腸菌群細菌的數目來判定水源是否受糞便所污染，并間接推測水源受腸道病原菌污染的可能性。一般規定每1000ml自來水中大腸菌群細菌不得超過3個。

　　大腸菌群細菌是指一類好氧或兼性厭氧，能發酵乳糖，在乳糖培養基中經37℃ 24小時培養，能產酸產氣，革蘭氏陰性，無芽孢的桿菌。

　　本試驗采用多管發酵法，以最近似數的方式來記載，此一數字是根據概率公式來估算，有大于實際數字的傾向，在增加每種稀釋度的試管重復數后，可減少偏差。本法除了用于檢測水樣(淡水或海水)外，尚可用于泥漿、沉積物、污泥等的檢測。測定時先將這類固體或半固體樣品預先稱重，再加水稀釋，可取50克樣品，置于盛有450ml滅菌磷酸鹽緩沖液并裝有玻璃珠、石英砂的錐形瓶中，振蕩1—2分鐘，便成10-1稀釋，以用于檢驗。 材料與器皿 (1)培養基

　　二倍濃度的乳糖膽汁液體培養基

　　一倍濃度的乳糖膽汁液體培養基

　　伊紅——美藍瓊脂(E.M.B.)培養基

　　亮綠乳糖膽汁(B.G.B)液體培養基

　　營養瓊脂培養基

　　(2)滅菌移液管、滅菌稀釋水、試管、杜漢氏小管、革蘭氏染液、滅菌培養皿 方法與步驟 (1)假定試驗

　　①用10ml水樣，接種到二倍濃度的乳精膽汁管中往，重復接三支 。

　　②用lml水樣，接種到一倍濃度的乳精膽汁管中往，重復接種三支。

　　③制備水樣 10-1和 10-2的稀釋液。

　　④分別接種lml10-1和 10-2稀釋液到一倍濃度的乳糖膽汁管中，每個稀釋液接種三支。

　　⑤在35℃中培養48小時，觀察有無氣體和酸產生。

　　⑥在48小時以內，培養管內顛倒的杜漢氏管中有任何量的氣體積累，便可斷定為陽性假定試驗。若培養管內液體清楚而杜氏管中有氣泡時，可能為放置不當而殘存的空氣泡，不可與產氣的陽性反應相混同。無氣泡著為陰性。產酸者呈黃色。

　　(2) 確信試驗

　　①取呈陽性和陽性可疑的初步發酵試管，輕輕振蕩或轉動，然后以無菌的金屬接種環，轉移1環培養物至亮綠乳糖膽汁管中，于35C℃培養48小時。如在顛倒的杜漢氏管中產氣，不論其量多寡，皆為陽性確信試驗。

　　②凡初步發酵試驗管在24小時之前就顯示活躍的發酵(產氣量占杜漢氏管10%以上)的試管，應及時轉移至確信試驗的培養基。

　　(3)完成試驗

　　①取上述陽性確信試驗管，在伊紅一美藍平板上劃線分離，為了確保獲得分離的單菌落，須留意以下事項：a.劃線間距至少相隔0.5厘米; b.接種針尖端要稍彎曲;c.先對發酵管輕擊，并使之傾斜，以免接種針挑取到任何膜狀物或浮渣，d.劃線時要用針尖的彎曲部分接觸瓊脂培養基平面，以免刮傷或戳破培養基。劃線后培養皿顛倒，于35C培養24小時。

　　② 24小時后，觀察在EMB平板上出現的單個菌落，具核心及深綠色金屬光澤者為較典型的大腸菌群菌落。盡可能挑取典型的或接近典型的大腸菌群菌落，在營養瓊脂斜面上劃線，置37 ℃培養24小時。挑取斜面培養物制成涂片，進行革蘭氏染色，凡屬革蘭氏陰性桿菌，即確認了大腸菌群細菌的存在。

　　③ 在EMB平板上呈較典型的大腸菌群細菌還可再次轉接至乳糖膽汁發酵管中，在37℃下培養48小時，產生氣體者即確認了大腸菌群細菌的存在。

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